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- 高考复习教案
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- 2016/5/31 19:43:25
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湖南省长沙市长郡中学2016届高三生物二轮复习专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离学生版.doc 71.00 KB
湖南省长沙市长郡中学2016届高三生物二轮复习专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离教师版.doc 76.50 KB
专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离
一、课题目标
本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
二、课题重点与难点
课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
三、学习过程
A、自主学习
（一）、基础知识
一、凝胶色谱法
1、概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。
2、原理：(1)由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 。⑵当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。
分配色谱法 相对分子质量的大小 糖类化合物 通道 相对分子质量 较小 较长 较慢 较大 外部 较短 较快 相对分子质量
二、缓冲溶液
1、作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液pH的影响，维持pH 。
2、配制：由 种缓冲剂溶解于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
外界 酸和碱 基本不变 1-2 水 比例
三、电泳
1、概念：指 在电场的作用下发生 的过程。
2、原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上 或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。
3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的分离。
4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通
常使用 。
带电粒子 迁移 PH 多肽 核酸 正电 负电 电场 相反 带电性质 大小 形状 迁移速度 各种分子 琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳
四、实验操作
1、样品处理: 通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。
(1) 红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中
没有 ，表明红细胞已洗涤干净。
(2) 血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
(3) 分离血红蛋白溶液：把 离心后，将试管中的液体用 过滤、除去 ，于 中静置片刻后，分离出下层的 。
2、粗分离：即透析
(1)方法：将血红蛋白溶液装入 ，将 放入一定量适宜浓度的 中，透析 。
(2)目的：将 的杂质除去。
(3)原理：透析袋能使小分子自由进出，而将大分子物质保留在袋内。
3、纯化: 通过凝胶色谱柱将相对分子质量较大的杂质蛋白除去。操作如下：
(1) 凝胶色谱柱的制作。
(2) 凝胶色谱柱的装填
① 材料：本实验使用的是 。
② 方法：凝胶用 充分溶胀后。配成 ，一次性 倒人色谱柱内。不能有 存在；不能发生 流干，露出凝胶颗粒的现象。
(3) 样品的加入和洗脱
①a、准备：加样前，打开流出口，使柱内凝胶面上的 缓慢下降到与 平齐，关闭出口。
b、加样：用 小心地将1mL透析后的样品加到 的顶端，注意不要破坏 。
专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离
一、课题目标
本课题通过尝试对血液中血红蛋白的提取和分离，使学生能够体验从复杂体系中提取生物大分子的基本过程和方法，并了解色谱法、电泳法等分离生物大分子的基本原理，为今后学习运用这些技术打下基础。
二、课题重点与难点
课题重点：凝胶色谱法的原理和方法。
课题难点：样品的预处理；色谱柱填料的处理和色谱柱的装填。
三、学习过程
A、自主学习
（一）、基础知识
一、凝胶色谱法
1、概念：也称做 ；是根据 分离蛋白质的有效方法。
2、原理：(1)由 构成的凝胶，内部有许多贯穿的的 。⑵当 不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量 的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，而相对分子质量 的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在 移动，路程 ，移动速度 ，从而使 不同的蛋白质分子得以分离。
二、缓冲溶液
1、作用：在一定范围内，抵制 的 对溶液pH的影响，维持pH 。
2、配制：由 种缓冲剂溶解于 中配制而成，通过调节缓冲剂的 就可以得到不同pH范围内使用的缓冲液。
三、电泳
1、概念：指 在电场的作用下发生 的过程。
2、原理：在一定的 下， 、 等生物大分子的可解离基团会带上
或 ，在 的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷 的电极移动。
3、作用：电泳利用了待分离样品中各种分子 的差异及分子本身的 、
的不同，使带电分子产生不同的 ，从而实现样品中 的分离。
4、方法：常用的电泳方法有 和 。测定蛋白质分子量时通
常使用 。
四、实验操作
1、样品处理: 通过 、 、 等操作收集血红蛋白溶液。
(1) 红细胞的洗涤：目的是 。分离时采取 ，直至上清液中
没有 ，表明红细胞已洗涤干净。
(2) 血红蛋白的释放：在 和 的作用下，红细胞破裂，释放出血红蛋白。
(3) 分离血红蛋白溶液：把 离心后，将试管中的液体用 过滤、除去 ，于 中静置片刻后，分离出下层的 。
2、粗分离：即透析
(1)方法：将血红蛋白溶液装入 ，将 放入一定量适宜浓度的
中，透析 。
(2)目的：将 的杂质除去。
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