《生物技术实践》教学案及练习（4个）

　　约12140字。
　　第一部分  微生物的利用（是重点）　　
　　第二部分  酶的应用 
　　第三部分     生物技术在食品加工中的应用 
　　第四部分     浅尝现代生物技术
　　天台中学    陈苏英
　　一、课标内容：进行微生物的分离和培养
　　二、教学要求：
　　实验1   大肠杆菌的培养和分离
　　基本要求 进行大肠杆菌的扩增，利用液体培养基进行细菌培养的操作。
　　进行大肠杆菌的分离，用固体平面培养基进行细菌的划线培养。 
　　发展要求 说明大肠杆菌培养的条件和实验原理。 
　　说明 实验2和实验3不作要求。 
　　三、知识要点：
　　1，微生物是指结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物，包括病毒、原核生物、原生生物和某些真菌。细菌是单细胞的原核生物，有细胞壁（肽聚糖）、细胞膜、细胞质，无成型的细胞核，只有一环状DNA分子（拟核）。以分裂（二分裂）的方式繁殖，分裂速度很快。用革兰氏染色法将细菌分为革兰氏阳性菌（革兰氏染液染色后，再脱色处理，细菌仍保留染色液的颜色）和革兰氏阴性菌两大类，区别在细胞壁的成分不同。大肠杆菌是革兰氏阴性（细胞壁薄，有荚膜）、兼性厌氧的肠道杆菌。
　　*2，细菌的分离方法有两种：划线分离法和涂布分离法。是消除污染杂菌的通用方法，也是用于筛选高表达量菌株的最简便方法之一。划线分离就是用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，在划线的过程中菌液逐渐减少，细菌也逐渐减少，。划线最后，可使细菌间的距离加大。将接种后的固体培养基培养10～20小时后，一个细菌细胞就会繁殖成许多细菌细胞，形成菌落，不会重叠。在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是有一个细菌产生的后代。用于基因工程的大肠杆菌的工程菌，可以用划线分离法获得产物表达能力高的菌株
　　由于工程菌的质粒中通常有抗性基因（如抗氨苄青霉素基因），如在培养基中加入一定量的氨苄青霉素，由于非工程菌的其他杂菌都没有抗性基因，所以在划线后只有存在抗性基因的工程菌能生存下来。
　　涂布分离时，需要先将培养的菌液稀释，通常稀释到10-5～10-7之间，然后去0.1ml不同稀释度的稀释菌液放在培养皿的固体培养基上，用玻璃刮刀涂布在培养基平面上进行培养，在适当的稀释度下，可产生相互分开的菌落。通常每个培养皿中有20个以内的单菌落为最合适。将每个菌落分别接种在斜面上扩增培养后，再做功能性实验。
　　划线分离法，方法简单；涂布分离法，单菌落更易分开，但操作复杂。
　　在培养微生物时，必须进行无菌操作。其首要条件是各种器皿必须是无菌的，各种培养